Ketika kita berbicara tentang poliamfolit , kita mengacu pada jenis molekul berukuran besar yang memiliki beberapa kelompok, apakah mereka asam atau basa; dapat dikatakan bahwa mereka adalah molekul seperti protein .
Untuk berbicara tentang poliamfolit, kita harus mengetahui dan mengetahui cara menghitung apa yang dikenal sebagai titik isoelektrik (pl) . Untuk menghitungnya ketika ada lebih dari dua kelompok bermuatan, itu menjadi tugas yang kompleks, tetapi ketika molekul mengandung kelompok yang bermuatan positif atau negatif, titik isoelektrik akan menjadi sekitar nol sebagai muatan bersih.
Jika gugus asam lebih banyak terdapat dalam molekul, maka titik isoelektriknya akan cukup rendah, sedangkan jika gugus yang dominan adalah tipe basa, maka titik isoelektriknya akan lebih tinggi.
Untuk menentukan titik isoelektrik poliamfolit, kita dapat melakukannya secara eksperimental, melalui metode yang cukup sederhana, yang dikenal sebagai elektroforesis . Ketika medan listrik disuplai ke larutan bermuatan ion-ion ini, molekul yang bermuatan positif cenderung bergerak menuju sisi katoda, sedangkan yang bermuatan negatif bergerak menuju anoda.
Poliamfolit dapat dipisahkan tergantung pada nilai titik isoelektriknya, karena amfolit biasanya tidak bergerak ke segala arah ketika berada pada titik isoelektriknya, karena memiliki muatan bersih bernilai nol. Menggunakan metode yang dikenal sebagai pemfokusan isoelektrik, amfolit berhasil bergerak melalui gradien pH, kembali untuk tetap tidak bergerak pada titik isoelektriknya. Jadi, dengan cara ini, amfolit dipisahkan dan titik isoelektrik masing-masing dihitung.
Ketika kita memperlakukan polipeptida sebagai poliamfolit, pHlah yang menentukan muatannya. Ini, selain memiliki gugus amino bebas yang diakhiri, dan gugus karboksil bebas, biasanya memiliki komposisi asam amino tertentu dengan gugus tipe yang dapat terionisasi, yang terletak di rantai sampingnya. Gugus-gugus yang berbeda ini memiliki kisaran nilai pKa yang luas, namun semua gugus bersifat asam atau basa lemah. Inilah sebabnya mengapa polipeptida biasanya diambil sebagai contoh ideal untuk berbicara tentang poliamfolit.
Untuk membicarakan muatan polipeptida dengan pH asam, kita dapat mengambil contoh tetrapeptida, seperti Glu-Gly-Ala-Lys. Dengan cara ini, perilaku tetrapeptida tersebut dapat ditentukan pada pH yang berbeda, untuk dapat melihat perubahan muatan listrik, melalui residu asam amino yang berbeda, serta gugus amino dan gugus karboksi terminal. Jadi kita bisa mulai dengan tetrapeptida dalam larutan yang cukup asam, sekitar pH nol. Pada pH tersebut, yang berada di bawah pKa gugus yang ada, kemungkinan residu yang dapat terionisasi yang ditemukan akan berada dalam bentuk terprotonasi. Gugus tipe amino akan bermuatan positif, dan dengan demikian semua gugus karboksil akan bermuatan nol. Dengan demikian, molekul akan menemukan, pada pH tersebut, muatan positif 2.
Di sisi lain, untuk berbicara tentang muatan polipeptida dengan pH basa, proton dikeluarkan dari larutan, kelompok yang berbeda akan bebas dari proton ke nilai yang mendekati nilai pKa mereka. Saat proton dihilangkan, pH naik, dan karena itu lebih banyak kelompok yang tersisa tanpa proton. Muatan positif jatuh dan melewati titik isoelektrik bernilai nol. Semakin banyak basa ditambahkan, molekul berubah menjadi muatan negatif, mencapai muatan negatif bersih -2, dengan pH yang cukup tinggi.