Urea adalah produk akhir dari metabolisme protein dan asam amino dalam tubuh manusia. Dalam degradasi protein, beberapa asam amino diperoleh, yang kehilangan gugus aminonya. Gugus amino ini diubah menjadi amonia, yang diubah menjadi urea di tingkat hati. Urea dalam darah disaring oleh glomerulus ginjal, sebagian direabsorbsi di tubulus, tetapi sebagian besar diekskresikan dalam urin. Ini adalah rute utama eliminasi kelebihan nitrogen dalam tubuh manusia.
Penentuan kadar urea dalam darah (azotemia), bersama dengan dosis kadar kreatinin, adalah tes yang paling sering digunakan untuk mengevaluasi fungsi ginjal. Tingkat ureum dalam darah dapat meningkat pada pasien yang dietnya kaya protein, tetapi tingkat ureum yang tinggi dalam darah, bersama dengan peningkatan tingkat kreatinin, menunjukkan penurunan fungsi ginjal.
Patologi lain yang dapat meningkatkan ureum darah adalah: gagal jantung kongestif, infeksi, penyumbatan pada saluran kemih, dll.
Pada tahun 1913, Marshall mengembangkan tes untuk menentukan azotemia, menggunakan enzim urease. Enzim ini bekerja pada urea, melepaskan amonia. Berbagai metode dirancang untuk memberi dosis amonia yang dilepaskan ini, termasuk uji indofenol Berthelot dan reaksi Nessler.
Tetapi baru pada tahun 1965 Talke dan Schubert menerbitkan metode enzimatik lengkap untuk penentuan azotemia, berdasarkan aksi urease dan glutamat dehydrogenase (GLDH). Sebagian besar teknik yang saat ini digunakan untuk dosis urea dalam darah dan urin didasarkan pada metode ini.
Untuk pengukuran azotemia, darah pasien harus diambil saat perut kosong, dengan pungsi vena atau pungsi arteri. Darah yang terkumpul dapat dimasukkan ke dalam tabung antikoagulan, misalnya heparin, atau menggunakan tabung tanpa antikoagulan. Darah harus disentrifugasi, untuk memisahkan sel darah dari serum atau plasma.
Serum atau plasma ini dikontakkan dengan reagen untuk pengukuran urea, berlangsung reaksi sebagai berikut:
Urea + H2O ——— urease ——-> 2 NH4 + CO3
Urea dihidrolisis oleh aksi enzim urease, melepaskan amonia dan karbonat.Kemudian amonium yang dihasilkan bereaksi dengan alfaketoglutarat dan NADH yang terkandung dalam reagen, di bawah aksi enzim GLDH, memperoleh glutamat dan
NAD + alfafacetoglutarat + NH4 + NADH ——- GLDH ——> L- glutamat + NAD + + H2O
Pengurangan absorbansi karena konsumsi NADH diukur secara kinetik.
Ini berarti bahwa larutan awalnya memiliki konsentrasi NADH tertentu yang diketahui, dengan absorbansi tertentu. Saat NADH dikonsumsi, daya serap larutan menurun.
Penurunan ini diukur secara fotometrik, selama periode waktu tertentu. Semakin tinggi konsentrasi urea dalam darah, semakin rendah absorbansi yang diukur setelah waktu tersebut.