Flow cytometry adalah teknik yang digunakan untuk menghitung sel tergantung pada morfologinya . Ini membutuhkan peralatan khusus, sebuah sitometer, yang mampu, pertama, mengindividualisasikan sel-sel dan kemudian membuatnya melewati satu per satu melalui laser, berkat ukuran mereka yang dapat diketahui. Data laser akan dikomputerisasi untuk mendapatkan, misalnya, rata-rata ukuran sel dalam suatu populasi, atau ukuran intinya.
Sel A. thaliana dibagi pada flow cytometer tergantung pada salinan materi genetiknya dalam 2 salinan, 4, 8 dan 16.
Teknologi yang akan berkembang dalam flow cytometry cararn dipatenkan oleh Wallace H. Coulter pada tahun 1953 . Meskipun klitometer penyerapan elektromagnetiknya akan sangat bervariasi untuk mencapai kompleksitas sitometer berbasis fluoresensi dan pemisahan sel saat ini.
Prinsip teknik : teknik ini didasarkan pada prinsip impedansi Coulter. Sel-sel individual dan ditempatkan dalam larutan dengan pH yang disesuaikan, dilewatkan melalui saluran sekitar 0,2 mikrometer. Saluran dilintasi oleh sinar laser yang jatuh tegak lurus dan ditangkap di sisi lain saluran oleh detektor (disebut penerima hamburan maju). The laser akan diperlakukan dengan lensa untuk fokus pada bagian saluran dan juga bahwa cahaya insiden adalah monokromatik. Saat sel lewat, sinar laser dipotong di atas penerima untuk waktu yang sebanding dengan ukuran sel. Sebuah komputer membutuhkan waktu yang berlalu dengan berlalunya sel (mikrodetik) dan setelah melewati semua sel populasi memberikan data variasi ukuran sel populasi.
Saat ini, sitometer mampu menganalisis ribuan partikel dalam satu detik . Selain penerima utama ada lain penerima (satu atau dua biasanya) yang terletak miring ke saluran, ini disebut sisi detektor pencar. Ketika cahaya jatuh pada mereka pada sudut miring, mereka tidak menangkap volume total melainkan mengumpulkan data tentang struktur fisik dan kimia internal mereka . Dengan mereka, informasi diperoleh tentang organel sel, ukuran dan komposisinya. Selanjutnya, jika sel – sel tersebut sebelumnya telah diberi perlakuan atau memiliki gen reporter, maka fluoresensi populasi dapat dianalisis untuk mengetahui berapa banyak sel yang memiliki karakteristik tertentu.
Setelah mendapatkan data di flow cytometer, mereka harus diproses oleh komputer . Ada software khusus dalam hal ini, yang biasanya dijual bersama-sama dan khusus untuk setiap jenis cytometer. Pengolahan data dapat dilakukan dengan gating , di mana data muncul sebagai titik awan pada plot dua dimensi yang memisahkan populasi berdasarkan ukuran atau fluoresensi .
Peningkatan perlakuan komputerisasi data telah memungkinkan identifikasi otomatis sel-sel sampel, melalui algoritma probabilitas komputer mengklasifikasikan sel-sel. Ada database publik di internet yang berisi informasi tentang ratusan populasi sel.
Di artikel lain kita akan berbicara tentang aplikasi perawatan kesehatan dan penelitian yang dapat diterima oleh flow cytometer. Antara lain, deteksi kanker, AIDS, baca di sini (coming soon).