Teknik untuk mengukur pertumbuhan bakteri

Ketika mikroorganisme berada dalam media yang cocok untuk pertumbuhannya, ia akan berkembang biak. Jika media tidak cocok, ia tetap tidak aktif, mati, atau bersporulasi. Ketika mikroorganisme tumbuh, ia melakukannya dengan cara yang seimbang: ia mensintesis semua komponennya saat dibutuhkan. Waktu generasi adalah waktu yang dibutuhkan sel punca untuk menghasilkan dua sel anak, dan itu tergantung pada media kultur.

Pengukuran laboratorium pertumbuhan mikroba dapat dilakukan dengan berbagai cara:
– Penghitungan satuan : disebut juga pencacahan lempeng. Ini adalah metode yang baik, karena hanya memungkinkan penghitungan sel yang layak, yaitu sel yang mampu membelah untuk menghasilkan keturunan. Secara teoritis, setiap sel yang layak dapat menimbulkan koloni. Ada dua cara untuk melakukan penghitungan ini: dengan penyemaian permukaan atau dengan menuangkan ke dalam piring. Pada penyemaian permukaan, kurang dari 0,1 mililiter ditempatkan pada permukaan media, menggunakan batang kaca bengkok yang steril. Dalam penuangan, media steril dicampur dengan inokulum dan diinkubasi. Dalam hal ini, inokulum bisa 0,1 sampai 1 mililiter. Selain itu, dengan ultrasound, koloni dapat dipisahkan sedikit untuk menghitungnya dengan lebih baik. Mengenai jumlah pengenceran yang harus dimiliki inokulum, pengenceran serial dibuat, umumnya berdasarkan sepuluh. Jumlah koloni dikalikan dengan faktor pengenceran memberi kita jumlah koloni sebenarnya.

– Ruang hitung: digunakan untuk media cair. Kelemahan utamanya adalah tidak membedakan sel hidup dari sel mati atau partikel tersuspensi. Di ruang ini, permukaan slide ditandai dengan kisi-kisi yang memudahkan penghitungan.

– Pengukuran massa dan kekeruhan sel : sel dapat menghamburkan cahaya. Semakin banyak sel dalam suspensi, semakin banyak cahaya yang tersebar. Dispersi ini dapat diukur dengan spektrofotometer atau dengan fotometer. Untuk organisme uniseluler, kerapatan optik – satuan pengukuran spektrofotometer – sebanding, dalam batas tertentu, dengan massa sel dan jumlah sel, sehingga dapat digunakan sebagai ukuran penghitungan tidak langsung. Untuk menghindari banyak kesalahan, harus dibuat kurva standar yang menghubungkan pengukuran langsung dengan pengukuran kekeruhan tidak langsung. Selanjutnya, berat kering juga dapat dikaitkan dengan jumlah sel: volume yang diketahui disaring dan sampel dibiarkan kering. Massa kering sel bakteri kira-kira sepuluh sampai dua puluh persen dari massa basah.

– Jumlah koloni: di lain waktu, tidak didasarkan pada sel tetapi dari jumlah spora yang diketahui. Penghitung koloni mengukur perjalanan partikel melalui larutan garam per satuan volume. Batas dapat diatur sehingga hanya partikel dengan ukuran tertentu yang diukur, misalnya antara 0,2 dan 1 nanometer. Masalah dengan metode ini adalah hanya menghitung partikel, dan tidak membedakan sel hidup dari sel mati.

Related Posts