noda utara

Northern blotting adalah teknik pemisahan RNA . Berkat itu kita dapat, dari sampel biologis , dari organisme apa pun, kita dapat mengisolasi RNA tertentu jika kita mengetahui setidaknya sebagian dari urutannya. Ini juga memungkinkan RNA untuk dipisahkan tergantung pada ukurannya.

Northern blot muncul sebagai variasi dari Southern blot , teknik serupa yang dibuat untuk memisahkan molekul DNA . Southern mendapatkan namanya dari penciptanya, E. Southern . Utara disebut dengan cara ini sebagai oposisi (utara dan selatan) ke Selatan. Teknik untuk memisahkan RNA dirancang oleh James Alwine, David Kemp dan George Stark , pada akhir tahun 1970. Ada juga teknik lain berdasarkan teknologi yang sama untuk memisahkan protein, western , atau RNA dengan modifikasi pasca-transkripsi, Eastern noda, dll. Anda dapat membaca lebih lanjut tentang Southern blot di sini dan tentang western blot di sini .

Kuvet yang digunakan untuk Northern blot sama dengan untuk Western dan Southern blot.

Untuk melakukan Northern blot, pengetahuan sebelumnya tentang beberapa teknik laboratorium diperlukan . Untuk memulainya, sampel biologis harus menjalani perlakuan ekstraksi RNA menghilangkan protein dan DNA . RNA sangat sensitif terhadap degradasi dan itulah sebabnya ia harus bekerja dalam kondisi steril yang lebih besar dari biasanya di laboratorium. RNase, enzim yang mampu mendegradasi RNA, sangat sering terjadi.

Setelah RNA diekstraksi dari sampel, itu tersuspensi dalam air. Kemudian kita akan memuatnya pada gel agarosa yang telah ditambahkan formaldehida sehingga RNA kehilangan struktur sekundernya . Dengan cara ini ia berjalan pada gel tergantung pada ukurannya secara eksklusif. Anda dapat membaca lebih lanjut tentang gel agarosa di artikel kami di sini . Jika RNA yang ingin kita pisahkan kecil, poliakrilamida dapat digunakan sebagai pengganti agarosa. Dengan cara ini diameter pori yang lebih kecil dapat dicapai. Setelah RNA dipisahkan menurut ukurannya, sekarang saatnya untuk melakukan blot . Untuk ini kita akan menggunakan membran nilon atau bahan lain yang mampu menahan molekul RNA dengan kuat . Biasanya ikatan yang terbentuk antara RNA dan membran adalah kovalen. The berlalunya RNA dari gel ke membran dilakukan dengan arus langsung untuk meningkatkan kecepatan . Membran ditempatkan pada gel. Dan semuanya direndam dalam buffer salin yang akan meningkatkan konduktivitas proses. Jadi, ketika RNA berpindah dari gel ke membran, RNA akan mempertahankan pemisahannya berdasarkan beratnya.

Utilitas : Setelah transfer, membran dapat dibuka dengan probe RNA spesifik untuk memverifikasi bahwa RNA ini diekspresikan dalam jaringan tempat sampel berasal. Penggunaannya untuk membentuk pola ekspresi RNA yang berbeda dalam suatu jaringan dan untuk dapat membandingkan ekspresi antar jaringan sangat luas. Berkat Northern, kami dapat memisahkan produk penyambungan alternatif yang berbeda dari gen yang sama atau melihat dalam keadaan lingkungan seperti apa gen yang diinginkan akan diekspresikan .

Northern blot adalah teknik yang telah digunakan selama bertahun-tahun. Satu-satunya masalah yang muncul adalah kerapuhan RNA selama proses tersebut . Ada alternatif cararn untuk Utara. Misalnya microarrays atau qPCR (quantitative PCR), meskipun teknik ini hanya akan menunjukkan jumlah RNA, sehingga tidak akan memisahkan ukuran RNA yang berbeda.

Related Posts