Enzim restriksi

Enzim restriksi adalah enzim dengan fungsi endonuklease , yaitu mampu mengenali urutan DNA tertentu dan memotong kedua untai DNA. Enzim ini khas dari semua organisme. Mereka dari bakteri dipelajari secara luas dan merupakan alat mendasar di laboratorium, karena berkat mereka DNA dapat dipotong baik untuk memperkenalkan urutan yang menarik, maupun untuk menghilangkan urutan.

Tempat pengenalan sekuen enzim restriksi biasanya tidak terlalu jauh dari tempat pemotongannya, menjadi hal yang wajar jika urutannya sama. Ini urutan biasanya antara 4 dan 12 nukleotida dengan kapasitas pengakuan urutan yang bervariasi antara enzim yang berbeda. Beberapa enzim hanya memotong urutan tertentu, misalnya enzim BamhI mengenali secara eksklusif dalam urutan GGATCC dan titik potongnya berada di antara dua guanin dari urutan pengenalan. Kasus lain dari enzim restriksi, tetapi dalam hal ini memungkinkan beberapa variasi dalam urutan pengenalannya adalah AarI, yang urutan pengenalannya adalah GACNNNNNNGTC, di mana N adalah nukleotida apa pun. Seperti yang dapat dilihat, zona pengenalan harus memiliki arti yang sama, urutan basa yang sama, dalam rantai positifnya dan dalam rantai negatif dalam arti 5 ‘-> 3’ , karena enzim harus dapat membaca rantai tersebut. terlepas dari untaian.

Salah satu fungsi alami dari enzim ini adalah untuk melindungi tubuh dari virus dan pertukaran genetik yang tidak diinginkan . Untuk menghindari kejadian ini, genom biasanya tidak memiliki target enzim restriksi yang melindunginya atau, jika ada, yang hampir tidak dapat dihindari, biasanya ditandai dengan metilasi agar tidak diserang. Di sisi lain, beberapa enzim restriksi hanya bekerja pada target restriksi yang termetilasi.

Tata nama enzim restriksi terdiri dari 3 huruf, satu huruf tambahan dan angka, tiga huruf menunjukkan genus (huruf yang sesuai dengan genus selalu dikapitalisasi) dan spesies, huruf berikutnya, yang masuk huruf kapital, itu sesuai dengan strain dan angka dalam angka Romawi menunjukkan urutan identifikasi enzim itu. Misalnya EcoRI berarti bahwa itu adalah enzim restriksi yang dicirikan dalam Escherichia coli, dalam galur RY13 dan I, yang pertama kali diidentifikasi dalam EcoR.

Enzim restriksi yang paling sering adalah kompleks multiprotein yang dapat terdiri dari tiga jenis tergantung pada tindakan yang dapat dilakukan.

The tipe 1 dapat baik memotong dan urutan unmethylated untuk menandai itu sebagai “cut”. Enzim-enzim ini adalah yang terbesar dan situs pengenalan berjarak sekitar 100 basa dari situs pengenalan, untuk memindahkan DNA dari satu situs ke situs lain membutuhkan pengeluaran ATP. Mereka juga membutuhkan kofaktor untuk operasi mereka, Mg ++ dan SAM (S-adenosil-metionin).

Bagi tipe 2 tidak dapat methylate DNA. Mereka tidak membutuhkan ATP, tetapi mereka membutuhkan kedua kofaktor. Pengakuan dan pemotongan situs adalah sama.

Ini adalah situs pengenalan dan pembelahan EcoRI, meninggalkan dua ujung lengket 4-dasar.
Bagi tipe 3 merupakan kompleks oligomer yang target adalah sekitar 25 basis dari situs pengakuan, itu memerlukan dua urutan pengakuan berlawanan, untuk operasi itu membutuhkan SAM, Mg ++ dan ATP.

Scroll to Top